H
hardyboywwe
[TẶNG BẠN] TRỌN BỘ Bí kíp học tốt 08 môn
Chắc suất Đại học top - Giữ chỗ ngay!!
ĐĂNG BÀI NGAY để cùng trao đổi với các thành viên siêu nhiệt tình & dễ thương trên diễn đàn.
Genome đơn bội của người có hơn 3000 Mbp, nằm trong 23 nhiễm sắc thể. Kích thước trung bình của 1 nhiễm sắc thể là 150 Mbp. Đây là một kích thước quá lớn để có thể khuếch đại bằng PCR (kỹ thuật PCR cho phép khuếch đại đoạn gen 10 Kbp, một số kỹ thuật đặc biệt có thể lên tới 40 Kbp). Do vậy, genome phải được cắt thành các đoạn có kích thước ngắn hơn bằng enzyme cắt giới hạn. Tuy nhiên các phân đoạn cắt giới hạn vẫn có kích thước lớn hơn nhiều so với kích thước có thể giải mã hoàn toàn toàn trong một phản ứng. Như vậy phải làm sao để đoạn ADN cần xác định trình tự có kích thước vừa phải, phù hợp với phản ứng PCR. Tuy nhiên, làm như vậy sẽ phải lặp lại nhiều lần các bước cắt giới hạn, lập bản đồ giới hạn, giải trình tự. Để công việc giải mã gen nhanh chóng và ít tốn kém, người ta lập các cấu trúc contig. Genome được được cắt thành các đoạn có kích thước lớn, nhân dòng vào vector BAC. Mỗi đoạn này lại được cắt thành các đoạn nhỏ hơn, có trình tự gối lên nhau, nhân dòng vào vector như bacteriophage hay cosmid. Các đoạn lại tiếp tục được cắt ngắn và nhân dòng vào plasmid. Các đoạn ADN trong plasmid được giải trình tự và nhập dữ liệu vào máy tính. Chương trình máy tính sẽ sắp xếp các đoạn ADN ngắn theo đúng trình tự dựa trên trình tự gối. Sự lắp ráp các phân đoạn này sau đó sẽ cho một trình tự liên tục duy nhất. Việc giải mã các đoạn ADN ngắn có trình tự nằm gối còn đảm bảo cho mọi phần của NST đều được phân tích (hay nói cách khác là không bỏ sót phần nào).
Việc nhân dòng trong vi khuẩn không chỉ giúp khuếch đại các đoạn ADN có kích thước lớn mà còn giúp lưu giữ các phân đoạn ADN, tạo ra thư viện genome phục vụ các các nghiên cứu khác sau này.
Việc nhân dòng trong vi khuẩn không chỉ giúp khuếch đại các đoạn ADN có kích thước lớn mà còn giúp lưu giữ các phân đoạn ADN, tạo ra thư viện genome phục vụ các các nghiên cứu khác sau này.